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菌落總數檢測過程中TTC添加常見問題解答

發布時間:2019-12-03    瀏覽次數:472

從事微生物檢測的朋友都知道,在菌落總數檢測時,經常添加TTC這種物質,哪什么是TTC?添加TTC又有什么作用?

TTC:  俗稱紅四氮唑,學名2,3,5-三苯基氯化四氮唑,化學式如下:

在菌落總數檢測時,添加TTC可以起到兩方面的作用:

其一,TTC可以使菌落顯紅色,便于區分菌落和雜質,更利于計數;

其二,TTC可以有效的防止平板上的菌落蔓延情況。這兩種作用的原理是不同的,TTC溶于水是無色的,而嗜中溫性需氧菌在新陳代謝過程中產生的琥珀脫氫酶可以使無色的TTC被還原成紅色的TPF,使菌落顯色,這是顯色的原理;同時TTC還具有抑制某些革蘭氏陽性菌生長的作用,因此會防止菌落蔓延。但既然會抑制細菌的生長,那會不會造成檢測誤差呢?其實只要合理使用,注意添加量,對檢測結果的影響并不是很大,是可以忽略不計的。

有專家對此做過實驗,實驗結果表明培養基內TTC濃度在0.0003%-0.001%(w/v)的范圍內對菌落生長抑制作用不顯著,但濃度太低菌落的顯色效果并不是很好,因此推薦大家按照TTC濃度為0.0005%的量來添加就不會對檢測結果產生較大影響,還會使菌落顯色方便計數。為了方便大家在檢測過程中方便添加,小編特意做了一個表格,方便大家查詢:

菌落總數檢測

除了添加量之外,菌落總數檢測時使用TTC過程中我們還應該注意以下幾點:

要點1:TTC的配制過程,一定要在無菌條件下進行。因為我們配制好的TTC溶液在檢測時是直接加入到培養基中的,必須保證TTC溶液時無菌的,配制用水也必須是無菌水。

要點2:TTC具有比較強的光敏性,見光易分解,因此無論是TTC粉末還是配制好的TTC溶液都要注意避光冷藏保存,配制好的溶液一定要放在棕色的試劑瓶里。

要點3:TTC溶液要在菌落總數檢測過程中直接加入滅菌完的培養基中,即在傾倒平皿之前加入培養基然后搖勻使用。盡量不要將TTC溶液加入培養基后一起滅菌,這樣操作會使培養基顏色加深,不利于顯色和計數。

要點4:若顯色效果不是很好,可以考慮提高一下TTC濃度,但不要超過0.001%的濃度,否則會使檢測結果出現比較大的偏差。

要點5:加TTC溶液還可以有效的控制平板培養基上的菌落蔓延情況,若是添加試劑的主要目的是為了控制菌落蔓延,建議增加培養基中TTC的濃度,濃度大約0.0008%時就會起到比較好的效果,并且不會影響結果。

任何方法都會是雙刃劍,添加TTC顯色當然也是如此,添加TTC最主要的問題就是它的抑菌作用,會造成檢測結果偏低,因此很多人不愿使用。其實若是不存在雜質干擾或者一些特殊情況可以比較精確的計數,小編也建議大家不要一昧因為顯色之后容易計數就進行添加,畢竟這只是在一些特殊情況下采用的非常規手段。


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