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15 版與10版《中國藥典》中制藥微生物無菌檢查對比

發布時間:2019-11-21    瀏覽次數:1354

2015年版《中國藥典》在微生物檢驗方法上做了很多更新,今天就簡單講下新版藥典無菌檢查有哪些改動。

1、 微生物檢測環境

對于微生物檢測環境的要求,原10版藥典是在10000級下的局部100級的單向流空氣區域或隔離系統中進行。而15版藥典在“1101無菌檢查法”中則寫道,無菌檢查應在無菌條件下進行,實驗環境必須達到無菌檢查的要求,檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作,防止微生物污染,防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。突然看到這的,大家可能會感到疑惑,這不就是沒有要求了嗎?

相對于10版的要求,這反而是降低了檢測環境的要求。其實,并不是如此,“9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則”中,則是寫出了無菌檢查應在B級背景下的A級單向流潔凈區域或隔離系統中進行。檢測環境并沒有降低標準,只是變成了推薦,變換了位置,因此對于藥典的解讀和學習真的需要我們靜下心來,認真的去學習。

2、 微生物培養基

其次對培養基要求 。在微生物檢驗中,培養基是實驗的重要組成部分。檢驗的合理性和真實性,主要是通過培養基來實現的。10版藥典檢驗用的是改良馬丁培養基和硫乙醇酸鹽流體培養基,而15版藥典則是改用了胰酪大豆胨液體培養和硫乙醇酸鹽流體培養基。

不知道大家在藥典升級的時候有沒有做過培養基的促生長能力的對比,當時我們有簡單做過,就生長時間而言,胰酪大豆胨液體培養基比改良馬丁的增長時間要短些,簡而言之就是前者的生長狀況會更好些。同時,硫乙醇酸鹽流體培養基在培養某些芽孢桿菌的能力上有局限性,胰酪大豆胨液體培養基則可以作為很好的補充。如何確定培養基是否質量合格,或者怎樣才能用于無菌檢驗,這就要看培養基促生長實驗或者說靈敏度測試了。當然對于無菌檢測的培養基還需要進行培養基的無菌性實驗。

原10版藥典中靈敏度實驗是這樣描述:

“取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養基9支,分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2 支, 另1支不接種,作為空白對照,置30~35℃培養3天;取每管裝量為9m的改良馬丁培養基5支,分別接種小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接種,作為空白對照,置20~25℃培養5天。逐日觀察結果?!?/p>

15版藥典則變的更加平衡:

“取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養基7 支,分別接種小于100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支,另1 支不接種作為空白對照,培養3 天;取每管裝量為9ml 的胰酪大豆胨液體培養基7支,分別接種小于100CFU的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接種作為空白對照,培養5天。逐日觀察結果?!?/p>

從說明上可以看出,15版藥典更加接近美國藥典和歐洲藥典。從促生長能力上來說,胰酪大豆胨液體培養基在促進芽孢桿菌的生長能力上優于硫乙醇酸鹽流體培養基,無菌檢查使用前者進行芽孢桿菌的檢測,因此需要用芽孢桿菌考察其促生長能力。不僅培養基靈敏度實驗10版藥典和15版藥典有所不同,而且培養基的無菌性實驗也是有所不同。10版要求“每批培養基隨機抽取不少于10支(瓶),5支(瓶)置3 0 ~ 3 5 ℃、另5支(瓶)置2 0 ~ 2 5 ℃培養14天,均應無菌生長?!?/p>

而15版則要求,“每批培養基隨機取不少于5支(瓶),置各培養基規定的溫度培養14 天,應無菌生長?!?5版藥典取消了兩個溫度培養的要求,完全根據相應的培養時間去進行無菌性培養。這樣得出的結果更加合理,且滿足檢驗環境,畢竟我們不是進行模擬灌裝,兩個溫度確實是有點不合理。當然這是個人觀點,如有其他的觀點歡迎探討。

3、 方法適用性實驗

在方法適用性實驗中。10版藥典,方法適用性的菌種和培養基靈敏度所使用的是一樣的。而15版藥典中則將靈敏度實驗中的銅綠假單胞菌變成了大腸桿菌,這是因為大腸埃希菌對于一些抗革蘭氏陰性菌的抗生素更加敏感,所以在做無菌方法性實驗的時候這點要十分注意。

藥典改版后,大家也多數選擇薄膜過濾法進行無菌實驗,因此大家也會注意到一點,緩沖液沖洗量不要超過1000mL,對于這個地方,大家會帶來些許疑惑,因為有的時候可能樣品就超過了這個量,那我們的是要該怎么做呢?其實大家應該仔細看看藥典要求,他說的是緩沖液沖洗量,并沒有說和樣品加在一起。當然對于要進行歐盟和FDA 審計注冊的時候還要注意一點,對于膜的沖洗歐洲藥典和美國藥典要求不大于500mL。

然后是日常檢驗,依據方法適用性的檢測方法進行測試。但值得注意的地方是,中國藥典要進行陽性實驗,而歐美藥典則在日常檢驗中沒有要求進行陽性實驗。也要注意,陽性實驗中中國藥典要根據產品特性進行菌種的添加,所以大家對于陽性實驗要有合理的評估,然后再進行菌種的添加。

總結:在做無菌檢驗過程中,實際問題我們需要根據實際情況去分析。在面臨問題時候,不要急,也不要慌,合理的去思考問題,解決問題,這樣才有利于我們優化過程。


文章轉載自微生物研究院,僅為技術交流。


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